لوله كشي در اصفهان لوله بازكني اصفهان

لوله كشي در اصفهان لوله بازكني اصفهان

 لوله كشي در اصفهان

 لوله كشي در اصفهان

بافر نمونه گلوله هاي استخراج شده از مواد شوينده و به مقدار مساوي 20 _ گرم. غشاهاي سيناپسي درمان نشده با مواد شوينده سپس تحت الكتروفورز ژل 8% SDS-پلي آكريل آميد قرار گرفتند. دو ژل به صورت موازي اجرا شدند و يكي با رنگ آبي كوماسي رنگ آميزي شد تا از بارگذاري معادل اطمينان حاصل شود، و ديگري بر روي يك غشاي نيتروسلولزي Hybond-ECL، Amer-sham منتقل شد. با استفاده از سيستم Transblot Hoefer. غشاها در TBS سالين بافر Tris انكوبه شدند. حاوي 3 درصد شير بدون چربي در دماي 4 درجه سانتيگراد به مدت 12 ساعت و لكه ها به مدت 1 ساعت با آنتي بادي اوليه 0.5-1 _grml انكوبه شدند. در TBS حاوي 0.05% Tween 20 TBST. Anti-GluR1، anti-GluR2r3، anti-NMDAR2A و anti-NMDAR2B از Upstate Biotechnology، Anti-GluR2 از Chemicon خريداري شد. آنتي سيناپتوفيزين و آنتي NMDAR1 به ترتيب از Boehringer Mannheim و Pharmingen به دست آمد. پس از شستشو با TBST، غشاها با ضد خرگوش كونژوگه پراكسيداز يا ضد IgG موش رقت 1:3000، Amersham انكوبه شدند. به مدت 1 ساعت در دماي اتاق. غشاء شسته شد و آمرشام نورتابي شيميايي را افزايش داد. انجام شد. فيلم‌ها به‌صورت ديجيتالي در رايانه اسكن شدند و با استفاده از نرم‌افزارهاي Sigmagel و Sigma plot تجزيه و تحليل شدند. روز و به عنوان نسبت درصد نامحلول بودن بيان مي شود.يرنده هاي NMDA در PND 1، بيان زيرواحدهاي NM-DAR1 و NMDAR2B به وضوح در هر دو غشا سيناپسي تيمار نشده با مواد شوينده و تيمار شده با مواد شوينده مشاهده شد. ، به ترتيب. زير واحد NMDAR1 و NMDAR2B سطح بيان در غشاهاي سيناپسي در طول دوره پس از تولد افزايش يافت، اما هيچ تغيير رشدي قابل توجهي در نسبت درصد نامحلول هر دو زير واحد وجود نداشت. p)0.05. شكل 1A,B .. بيان زير واحد NMDAR2A از PND 8 مشاهده شد و نسبت نامحلول 78٪ بود. بيان NMDAR2A در غشاهاي سيناپسي تا PND 22 افزايش يافت. با اين حال، نسبت نامحلول زيرواحد NMDAR2A در طول دوره پس از زايمان تغيير معني‌داري نداشت. p)0.05. شكل 1A,B .. به منظور اطمينان از اينكه سطح بالاي بيان گيرنده NMDA در غشاي سيناپسي استخراج شده با مواد شوينده در سنين اوليه پس از تولد يك مصنوع نيست، ما بيان رشدي سيناپتوفيزين، يك پروتئين پيش سيناپسي را بررسي كرديم. به عنوان محلول در Triton X-100 w19x، هم در غشاهاي سيناپسي تصفيه نشده و هم در غشاهاي سيناپسي استخراج شده با مواد شوينده شناخته شده است. سطح بالايي از بيان سيناپتوفيزين در غشاهاي سيناپتيك درمان نشده با مواد شوينده در طول زندگي پس از تولد يافت شد، در حالي كه هيچ بيان سيناپتوفيزيني در غشاهاي سيناپسي استخراج شده با مواد شوينده در PND 1 و 8 با باندهاي بسيار ضعيف در PND 15 وجود نداشت و شكل 22 1A..